Effect of Clomiphene Citrate on the Ultrastructure of Testis in Albino Rats

SUMMARY: The aim of the present work was to study the closer effect of clomiphene citrate on the ultrastructure of the testis of adult albino rats to provide a basis for optimizing this drug in the treatment of male infertility. The testes were removed from both groups under anesthesia and then prepared for examination by light using hematoxylin and eosin stains and a transmission electron microscope. Semithin sections were cut into 1 µm thick sections, stained with toluidine blue, and examined by light microscopy for a survey. The desired areas were placed in the center, and other areas were trimmed. Primary spermatocytes showed marked nuclear changes (pyknosis), and their nuclear membranes were ill-defined and disrupted. The cytoplasm showed widespread degeneration of mitochondria and lysosomes and focal degeneration of the rough endoplasmic reticulum compared with the control group. The spermatids were pale, and the two phases of spermatogenesis were distinctly identifiable in the control group but were confused in the treated group. Some spermatids had interrupted nuclear membranes, also containing degenerated mitochondria, focal fragmentation of rough endoplasmic reticulum, and free ribosomes. Spermatozoa in the treated group appeared deformed compared to the control, where they had deformed head caps. Leydig cells of the treated group have an irregularly shaped nucleus, with focal chromatin aggregation and peripheral chromatin condensation on the inner surface of the nuclear membrane. The observations of the present work indicate a possible causal relationship between testicular affection and ingestion of clomiphene citrate, which can be avoided by close medical observations using ultrasonography, semen analysis, or testicular biopsy to detect early malignant changes. Furthermore, the drug should not be used for more than three to six cycles and should be stopped for at least three cycles before reuse. When clomiphene citrate is ineffective in the treatment of male infertility, human menopausal gonadotropin (hMG) administration is typically selected. However, high-dose hMG therapy is associated with a variety of adverse effects. In this work, we report the success of a modified clomiphene citrate regimen in increasing sperm count without any hazards to the testicular tissue.

El objetivo del trabajo fue estudiar el efecto del citrato de clomifeno sobre la estructura de los testículos de la rata albina adulta, con la finalidad de determinar la mejor manera de utilizar este fármaco en el tratamiento de la infertilidad masculina. Los testículos se extrajeron bajo anestesia y para su análisis a través de microscopio de luz se tiñeron con HE. Además, las muestras fueron preparadas para su examen con microscopía electrónica de transmisión. Por otra parte, se cortaron secciones semifinas de 1 µm de espesor, se tiñeron con azul de toluidina y se examinaron mediante microscopía óptica. Los espermatocitos primarios mostraron cambios nucleares marcados (picnosis) y sus membranas nucleares estaban mal definidas y alteradas. En el grupo experimental las células presentaban el citoplasma con degeneración generalizada de las mitocondrias y de los lisosomas y una degeneración focal del retículo endoplásmico rugoso en comparación con el grupo control. Las espermátidas estaban pálidas y las dos fases de la espermatogénesis eran claramente identificables en el grupo control, pero se confundían en el grupo tratado. Algunas espermátidas tenían membranas nucleares interrumpidas, y también contenían mitocondrias degeneradas, fragmentación focal del retículo endoplásmico rugoso y ribosomas libres. Los espermatozoides del grupo tratado se presentaban deformados en comparación con el control. Las células de Leydig del grupo tratado presentaban un núcleo de forma irregular, con agregación focal de cromatina y condensación de cromatina periférica en la superficie interna de la membrana nuclear. Las observaciones del presente trabajo indican una posible relación causal entre la afección testicular y la ingestión de citrato de clomifeno, que puede evitarse mediante observaciones médicas minuciosas a través de ecografía, análisis de semen o biopsia testicular para detectar cambios malignos tempranos. Además, el medicamento no debiera ser usado durante más de tres a seis ciclos y debe suspenderse durante al menos tres ciclos antes de volver a usarlo. Cuando el citrato de clomifeno es ineficaz en el tratamiento de la infertilidad masculina, normalmente se selecciona la administración de gonadotropina menopáusica humana (hMG). Sin embargo, la terapia con hMG en dosis altas se asocia con una variedad de efectos adversos. En este trabajo, informamos el éxito de un régimen modificado con citrato de clomifeno para aumentar el recuento de espermatozoides sin riesgo para el tejido testicular.

Efecto de Tropaeolum Tuberosum o "Mashua" (tropaeolaceae) sobre la expresión génica relacionada a espermatogénesis en ratón

Introducción: Tropaeolum tuberosum, conocido comomashua, es un tubérculo andino que tiene un valor tanto económico como nutritivo para las poblaciones de pocos recursos. Se cree que afecta la fertilidad masculina, porque los hombres andinos lo relacionan con impotencia y disminución de la capacidad fecundante. Estudios hechos en ratas que se alimentaron con mashua demostraron que hubo un 45% de decrecimiento de la tasa testosterona/dihidrotestosterona. El efecto de esta planta en la reproducción está relacionada a su contenido de isotiocianatos, compuestos que se unen covalentemente a las proteínas, las cuales pueden estar directa o indirectamente involucradas en el proceso espermatogénico. El propósito de esta investigación fue evaluar el efecto del extracto acuoso de la mashua sobre la espermatogénesis y la fisiología reproductiva de ratones. Métodos: Se evaluaron los parámetros morfofuncionales in vivo de espermios de ratones (espermatograma) y se cuantificó la expresión de: Cytochrome P450 17α-hydroxylase/17,20-lyase, proteína reguladora de esteroidogénesis aguda, ciclina y protamina, relacionados a la espermatogénesis. Resultados: A los 7, 14 y 21 días de dosificación, se vio afectado el conteo de espermatozoides, así como su motilidad progresiva (MP); por otra parte, se observó un retardo en la maduración de los mismos. En cuanto a la expresión génica, no se encontró diferencias significativas entre la expresión de los dos genes estudiados (cytochrome P450 17α-hydroxylase/17,20-lyase, ciclina). Conclusión: El efecto de la mashua no se da a nivel de la expresión de los genes involucrados en la espermatogénesis, sino a nivel de sus funciones como proteína.

Introduction: Tropaeolum tuberosum, known as "mashua" is an Andean tuber that holds both economic and nutritional value for low-income populations. It is believed that it affects male fertility because Andean men associate it with impotence and decreased fertility. Studies conducted on rats fed with "mashua" showed that there was a 45% decrease in the testosterone/dihydrotestosterone ratio. The effect of this plant on reproduction is related to its content of isothiocyanates, compounds that covalently bind to proteins, which may be directly or indirectly involved in the spermatogenic process. The purpose of this research was to evaluate the effect of the aqueous extract of "mashua" on spermatogenesis and reproductive physiology of mice. Methods: In vivo morphofunctional parameters of mouse sperm (spermatogram) were evaluated and the expression of Cytochrome P450 17α-hydroxylase/17,20-lyase, acute steroidogenesis regulatory protein, cyclin, and protamine related to spermatogenesis was quantified. Results: The results indicated that at 7, 14 and 21 days of dosing, the sperm count was affected, as well as their progressive motility (PM), on the other hand, a delay in their maturation was observed. Regarding gene expression, no significant differences were found between the expression of the two genes studied (Cytochrome P450 17α-hydroxylase/17,20-lyase, Cyclin). Conclusion: The effect of "mashua" does not occur at the level of gene expression involved in spermatogenesis, but at the level of its functions as a protein.

Up-regulation of Arl4a gene expression by broccoli aqueous extract is associated with improved spermatogenesis in mouse testes / La regulación positiva de la expresión del gen Arl4a por acción del extracto acuoso de brócoli se asocia con una mejor espermatogénesis en testículos de ratón

Abstract | Introduction: Broccoli (Brassica oleracea) is well known for its properties as an anticancer, antioxidant, and scavenger of free radicals. However, its benefits in enhancing spermatogenesis have not been well established. Objective: To study broccoli aqueous extract effects on sperm factors and the expression of genes Catsper1, Catsper2, Arl4a, Sox5, and Sox9 in sperm factors in mice. Materials and methods: Male mice were divided randomly into six groups: (1) Control; (2) cadmium (3 mg/kg of mouse body weight); (3) orally treated with 200 µl broccoli aqueous extract (1 g ml-1); (4) orally treated with 400 µl of broccoli aqueous extract; (5) orally treated with 200 broccoli aqueous extract plus cadmium, and (6) orally treated with 400 µl of broccoli aqueous extract plus cadmium. We analyzed the sperms factors and Catsper1, Catsper2, Arl4a, Sox5, and Sox9 gene expression. Results: An obvious improvement in sperm count and a slight enhancement in sperm motility were observed in mice treated with broccoli extract alone or with cadmium. Sperm viability was reduced by broccoli extract except for the 200 µl dose with cadmium, which significantly increased it. Interestingly, Arl4a gene expression increased in the 400 µl broccoli- treated group. Likewise, the Arl4a mRNA level in mice treated with cadmium and 200 µl of broccoli extract was higher than in the cadmium-treated mice. Furthermore, broccoli extract enhanced the mRNA level of Catsper2 and Sox5 genes in mice treated with 200 µl and 400 µl broccoli extract plus cadmium compared with the group treated solely with cadmium. Conclusion: The higher sperm count in broccoli-treated mice opens the way for the development of pharmaceutical products for infertile men.

Resumen | Introducción. El brócoli (Brassica oleracea) se conoce por sus propiedades como anticancerígeno, antioxidante y eliminador de radicales libres. Sin embargo, sus beneficios en la espermatogénesis aún no se han determinado suficientemente. Objetivo. Estudiar los efectos del extracto acuoso de brócoli sobre los factores espermáticos y la expresión de los genes Catsper1, Catsper2, Arl4a, Sox5 y Sox9 en ratones. Materiales y métodos. Los ratones machos se dividieron aleatoriamente en seis grupos: 1) control; 2) tratados con cadmio, 3 mg/kg de peso corporal; 3) tratados con 200 µl de extracto acuoso de brócoli (1 g ml-1); 4) tratados con 400 µl de extracto acuoso de brócoli; 5) tratados con 200 µl de extracto acuoso de brócoli más cadmio, y 6) tratados con 400 µl de extracto acuoso de brócoli más cadmio. El extracto acuoso de brócoli se administró por vía oral. Se analizaron los factores espermáticos y la expresión de los genes Catsper1, Catsper2, Arl4a, Sox5 y Sox9. Resultados. Se observó una mejoría obvia en el recuento y una ligera mejoría en la motilidad de los espermatozoides, en ratones tratados con extracto de brócoli solo o con cadmio. La viabilidad de los espermatozoides se redujo con el extracto de brócoli, excepto con la dosis de 200 µl más cadmio, la cual la aumentó significativamente. Curiosamente, la expresión del gen Arl4a aumentó en el grupo tratado con 400 µl del extracto. Asimismo, el ARNm del Arl4a en ratones tratados con cadmio y 200 µl del extracto, fue más abundante que en los ratones tratados solo con cadmio. Además, el extracto de brócoli aumentó la cantidad de ARNm de los genes Catsper2 y Sox5 en ratones tratados con 200 y 400 µl de extracto de brócoli más cadmio, en comparación con el grupo tratado únicamente con cadmio. Conclusión. El mayor número de espermatozoides en ratones tratados con brócoli abre el camino al desarrollo de productos farmacéuticos para hombres infértiles.

Efecto de la diabetes sobre la espermatogénesis / Effect of diabetes on spermatogenesis

La evidencia clínica que ha permitido relacionar la diabetes mellitus con la infertilidad se basa en la importancia del metabolismo de la glucosa durante el proceso de espermatogénesis, debido a que en los episodios tanto de hipoglucemia como de hiperglucemia pueden ocurrir cambios epigenéticos en algunas proteínas involucradas en la espermatogénesis. En la presente comunicación se describen los aspectos teóricos de los efectos de la diabetes sobre el líquido seminal con énfasis en la espermatogénesis(AU)

The clinical evidence that has made it possible to link diabetes mellitus with infertility is based on the importance of glucose metabolism during the spermatogenesis process, because in episodes of both hypoglycemia and hyperglycemia, epigenetic changes can occur in some proteins involved in spermatogenesis. This communication describes the theoretical aspects of the effects of diabetes on seminal fluid with emphasis on spermatogenesis(AU)

The morphology of paca (Cuniculus paca) testis with high dose of letrozole an aromatase inhibitor / La morfología del testículo de paca (Cuniculus paca) con altas dosis de letrozol, un inhibidor de la aromatasa

SUMMARY: The study reported the influence of the high and acute dose of Letrozole on the testis morphology in paca (Cuniculus paca), an aromatase inhibitor that reduces the endogenous estrogen, the essential hormone for spermatogenesis. Morphological changes were observed in seminiferous epithelium with germ cells with apoptotic characteristics and presence of vacuoles and nuclei in pycnose.

RESUMEN: El objetivo de este estudio fue analizar la influencia de una dosis alta de Letrozol en la morfología de los testículos de la paca (Cuniculus paca), un inhibidor de la aromatasa que reduce el estrógeno endógeno, la hormona esencial para la espermatogénesis. Se observaron cambios morfológicos en el epitelio seminífero con células germinales con características apoptóticas y la presencia de vacuolas y núcleos en picnosis.

Los ARNs no codificantes largos y su vinculación con las patologías testiculares / Long non-coding RNAs and their involvement in testicular pathologies / RNAs longos não-codificantes e sua ligação com patologias testiculares

Si bien la porción del genoma destinada a la síntesis de proteínas es muy pequeña, actualmente se sabe que casi todo el genoma se expresa bajo forma de ARNs no codificantes. Entre dichos ARNs se encuentran los ARNs no codificantes largos (lncRNAs). Aunque los lncRNAs han sido muy poco estudiados, recientemente han comenzado a centrar la atención de los investigadores, al descubrirse que los mismos pueden desempeñar diversas funciones en la regulación de la expresión génica. Además, su vinculación con patologías ha comenzado a ser puesta de manifiesto. Curiosamente, la cantidad de lncRNAs presentes en el testículo es abrumadoramente mayor que en cualquier otro órgano o tejido estudiado. Los perfiles de expresión de estos lncRNAs varían significativamente a lo largo de la espermatogénesis, y algunas evidencias sugieren que al menos algunos de ellos podrían participar en el proceso de formación de células germinales masculinas. No obstante, el conocimiento sobre el tema es aún muy escaso. En este trabajo revisamos la información disponible sobre la expresión de lncRNAs en el testículo y sus posibles funciones. Asimismo, analizamos algunos ejemplos que ilustran la participación de lncRNAs en el desarrollo de patologías como la infertilidad y el cáncer testicular.

Although the portion of the genome devoted to protein synthesis is very small, it is now known that almost the entire genome is expressed as non-coding RNAs. Among them, there are long noncoding RNAs (lncRNAs). Despite that lncRNAs have been very poorly studied, they have recently started to focus the attention of researchers, as it has been found out that lncRNAs can perform diverse functions in the regulation of gene expression. Besides, their involvement in pathologies is being revealed. Intriguingly, the amount of lncRNAs in the testis is overwhelmingly higher than in any other analyzed organ or tissue. LncRNA expression profiles significantly vary along spermatogenesis, and some evidence suggests that at least some of them could participate in the formation of male germ cells. However, knowledge on the subject is still very scarce. In this work we review the available information on the expression of lncRNAs in testis and their possible roles. We also analyze some examples that illustrate the participation of lncRNAs in the development of pathologies such as infertility and testicular cancer.

Embora a porção do genoma usada para a síntese proteica seja muito pequena, sabe-se agora que quase todo o genoma é expresso na forma de RNAs não-codificantes. Entre esses RNAs estão os longos RNAs não codificantes (lncRNAs). Embora os lncRNAs tenham sido pouco estudados, eles recentemente começaram a focar a atenção dos pesquisadores, ao descobrirem que podem desempenhar diversas funções na regulação da expressão gênica. Além disso, sua ligação com as patologias começou a ser revelada. Curiosamente, a quantidade de lncRNAs presentes nos testículos é esmagadoramente maior do que em qualquer outro órgão ou tecido estudado. Os perfis de expressão destes lncRNAs variam significativamente ao longo da espermatogênese, e algumas evidências sugerem que pelo menos alguns deles poderiam participar no processo de formação de células germinativas masculinas. No entanto, o conhecimento sobre o assunto ainda é muito escasso. Neste trabalho, revisamos as informações disponíveis sobre a expressão de lncRNAs no testículo e suas possíveis funções. Também analisamos alguns exemplos que ilustram a participação dos lncRNAs no desenvolvimento de patologias como infertilidade e câncer testicular.

Efecto de los extractos secos clorofórmico y de diclorometano de Tropaeolum tuberosum (Ruiz & Pavón) mashua sobre los parámetros seminales y toxicidad aguda / Effect of dry chloroformic and dichloromethane extracts of Tropaeolum tuberosum (Ruiz & Pavón) mashua on seminal parameters and acute toxicity

RESUMEN Con el objetivo de demostrar el efecto de los extractos secos clorofórmico y de diclorometano de Tropaeolum tuberosum R&P mashua sobre los parámetros seminales y su toxicidad aguda en ratones albinos, se utilizó dos grupos experimentales y un grupo control. Los ratones fueron sacrificados, después de 7 días, luego de recibir los dos tipos de extractos, realizando posteriormente el conteo de espermatozoides utilizando la cámara y el método de Neubauer. Los extractos aplicados por vía intraperitoneal, afectaron la cantidad de espermatozoides en ratones, obteniendo: que el grupo que recibió el extracto clorofórmico presentó disminución del 79,9% en el número de espermatozoides y el grupo con diclorometano presentó disminución del 77,1%, ambos con respecto al grupo control.

SUMMARY With the goal of proving the effect of chloroformic and dichloromethane dry extracts from Tropaeolum tuberosum R& P mashua, on the seminal parameters and its acute toxicity in albino mice. It was used two experimental groups and a control group. The mice were sacrificed, after 7 days while they were receiving the two kinds of extracts, making after that a sperm count, using for that the Neubauer's method and camera. The extracts, applied intraperitoneally, affect the amount of sperm on mice, getting: The group that received the chloroform extract showed a 79.9% decrease in the number of spermatozoids and the group that received the dichloromethane extract showed a decrease of 77.1%, both with respect to the control group.

Therapeutic effect of resveratrol on morphine-induced damage in male reproductive system of mice by reducing nitric oxide serum level / Efecto terapéutico de resveratrol sobre el daño inducido por la morfina en el sistema reproductor masculino de ratones reduciendo el nivel de óxido nítrico del suero

SUMMARY: Morphine is one of the naturally occurring phenanthrene alkaloids of opium that induces adverse effects on male reproductive system. Resveratrol is a phytoestrogen and antioxidant of red grape. The main goal is to investigate whether resveratrol could inhibit adverse effects of morphine on sperm cell viability, count, motility as well as testis histology, testosterone hormone and nitric oxide levels in mice. In the present study, 48 male rats were randomly divided into 8 groups (n=6) and were treated intraperitoneally for 14 days with normal saline, resveratrol (2, 8, 20 mg/kg/day), morphine (20 mg/kg/day) and morphine (20 mg/kg/day) + resveratrol (2, 8, 20 mg/kg/day). At the end of experiments, sperm parameters (sperm cell viability, count, motility and morphology), testis weight, the diameter of seminiferous tubules, testosterone hormone level and nitric oxide were analyzed. The data were analyzed by SPSS software for windows (version 20) using one-way ANOVA test followed by Tukey's post hoc test, and P<0.05 was considered significant. The results indicated that morphine administration significantly decreased testosterone level, count, viability and motility of sperm cells and testis weight and increased nitric oxide compared to the saline group (P=0.000). Administration of resveratrol and resveratrol plus morphine significantly increased motility, count and viability of sperm cells, somniferous tubule diameter and testosterone, while it decreased nitric oxide level compared to morphine group (P=0.025). It seems that resveratrol administration could increase the quality of spermatozoa and prevented morphine-induced adverse effects on sperm parameters.

RESUMEN: La morfina es uno de los alcaloides fenantreno del opio que induce efectos adversos en el sistema reproductivo masculino. El resveratrol es un fitoestrógeno y antioxidante de la uva roja. El objetivo principal de este trabajo fue investigar si el resveratrol puede inhibir los efectos adversos de la morfina sobre la viabilidad celular de los espermatozoides, el recuento y la motilidad, así como la histología de los testículos, la hormona testosterona y los niveles de óxido nítrico en ratones. Se dividieron, aleatoriamente, 48 ratas machos en 8 grupos (n = 6) y se trataron de forma intraperitoneal durante 14 días con solución salina normal, resveratrol (2, 8, 20 mg / kg / día), morfina (20 mg / kg / día ) y morfina (20 mg / kg / día) + resveratrol (2, 8, 20 mg / kg / día). Al final de los experimentos, se analizaron los parámetros espermáticos (viabilidad celular, recuento, motilidad y morfología), el peso de los testículos, el diámetro de los túbulos seminíferos, el nivel de la hormona testosterona y el óxido nítrico. Los datos fueron analizados con el software de SPSS para Windows (versión 20) usando una prueba de ANOVA de una vía seguida de la prueba post hoc de Tukey, y P <0,05 se consideró significativo. Los resultados indicaron que la administración de morfina disminuyó significativamente el nivel de testosterona, el recuento, la viabilidad y la motilidad de los espermatozoides y el peso de los testículos, además del aumento de óxido nítrico en comparación con el grupo salino (p = 0,000). La administración de resveratrol y resveratrol más morfina aumentó significativamente la motilidad, el recuento y la viabilidad de los espermatozoides, el diámetro de los túbulos seminíferos y la testosterona, mientras que disminuyó el nivel de óxido nítrico comparado con el grupo morfina (p = 0,025). En conclusión, la administración de resveratrol podría aumentar la calidad de los espermatozoides y prevenir los efectos adversos inducidos por la morfina sobre los parámetros espermáticos.

Potential radioprotective effect of AT1 receptor antagonists against morphological and ultrastructural changes in the testes induced by ionizing radiation / Potencial efecto radioprotector de antagonistas del receptor AT1 contra los daños morfológicos y ultraestructurales en los testículos inducido por la radiación ionizante

Radiotherapy is a source of human exposure to ionizing radiation. This pure energy causes deleterious effects on tissues, which result from oxidative stress, a phenomenon in which there is the participation of the Renin-Angiotensin System (RAS). The male genital organs are extremely radiosensitive and the action of radiation in the testes can significantly affect spermatogenesis. In search of potential radioprotective for male genital system, this study investigated whether the AT1 receptor antagonists minimize radiation-induced damage to reproductive tissues, by decreasing oxidative stress. Male Wistar rats were divided into six groups: 0 Gray (Gy) (control), 5 Gy (single dose in the scrotal area), telmisartan, losartan, 5Gy+telmisartan and 5Gy+losartan. The treatment started the day after irradiation with losartan 34 mg/kg (two times/day) and telmisartan 12 mg/kg (one time/day) during 60 days. For ultrastructural analysis, the testis fragments were fixed in 2 % glutaraldehyde and 4 % paraformaldehyde in 0.1 M phosphate buffer, pH 7.3. The material was postfixed for 2 h in 1 % osmium tetroxide. For collagen evaluation, the sections were stained with Picrosirius-red method. Serum testosterone was determined. The date showed the deleterious effects of gamma radiation on testicular ultrastructure. Rich accumulation of collagen fibers in the interstitium was observed in the irradiated groups, especially the irradiated and nontreated testes. No significant difference was detected in serum testosterone concentration among the studied experimental groups. Treatments with telmisartan and losartan influenced the onset of attenuation on ultrastructural damages arising from ionizing radiation. Although the data strongly suggest that AT1 receptor antagonists may promote radioprotection to the testes, further studies with a longer duration of treatment are required for these potentially positive effects to be maximized and, therefore, to better characterize radioprotection to reproductive parameters.

El tratamiento radioterápico es una fuente de exposición del ser humano a la radiación ionizante. Esta energía pura causa efectos deletéreos en los tejidos, debido al estrés oxidativo, fenómeno donde hay participación del Sistema Renina-Angiotensina. Los órganos genitales masculinos son extremadamente radiosensibles y la acción de la radiación en los testículos puede afectar significativamente la espermatogénesis. En la búsqueda de potenciales radioprotectores, este estudio ha investigado fármacos antagonistas del receptor AT1 que minimizan los daños radioinduzidos en los tejidos reproductivos, por medio de la disminución del estrés oxidativo. Ratones Wistar machos fueron distribuidos en seis grupos: grupo 0 Gray (Gy) (control), grupo 5 Gy (dosis única en el área escrotal), grupo telmisartán, grupo losartán, grupo 5Gy+telmisartán y grupo 5Gy+losartán. El tratamiento empezó en el día siguiente a la irradiación con losartán 34 mg/kg (2x/día) y telmisartán 12 mg/kg (1x/día), durante 60 días. Para el análisis ultraestructural, los testículos se fijaron en glutaraldehido (2 %) y paraformaldehido (4 %) con tampón de fosfato 0,1 M, pH 7,3. El material fue post-fijado en tetróxido de osmio (1 %). Para evaluar el colágeno fue utilizado el método Picrosirius Red. Fue determinada la concentración sérica de testosterona. Los datos mostraron los efectos deletéreos de los rayos gamma sobre la ultraestructura testicular. Fue observada una rica deposición de colágeno en el intersticio en los grupos irradiados, especialmente en el irradiado y no tratado. Entre los grupos, no se detectó ninguna diferencia significativa en la concentración sérica de testosterona. Los tratamientos con telmisartán y losartán influenciaron el comienzo de la atenuación de los cambios en la ultraestructura testicular de la radiación. A pesar de que los datos sugieren que los antagonistas del receptor AT1 pueden promover radioprotección a los testículos, estudios complementarios con una duración de tratamiento más extendida son necesarios para que los efectos potencialmente positivos sean maximizados y, por supuesto, puedan mejorar la caracterizacion de la radioprotección a los parámetros reproductivos.

Permanent germinal epithelium and reproductive cycle of Atractosteus tropicus (Lepisosteiformes: Lepisosteidae) males, Tabasco, Mexico / Epitelio germinal permanente y ciclo reproductivo en machos de Atractosteus tropicus (Lepisosteiformes: Lepisosteidae) Tabasco, México

Abstract:The tropical gar A. tropicus plays an important ecological role as it regulates other fish stocks in different water bodies in Southeastern México. Nevertheless, wild populations are declining, and one conservation alternative is the aquaculture production and basic knowledge of reproductive biology; for males, this requires the study of germ and somatic structures of testes, to characterize the reproductive cycle, and to provide basic knowledge for exploitation and conservation models and strategies. With this aim, a total of 24 males with an average sL = 47.2 cm were collected from wild populations from the Laguna Pomposú, municipality of Jalpa de Mendez (18°19' - 93°01'12" W), Tabasco, Mexico. Fish were collected with a trawl net and were transported live to the Tropical Aquaculture Laboratory, División Académica de Ciencias Biológicas (DACBiol), Universidad Juárez Autónoma de Tabasco (UJAT). Males were killed by prolonged immersion in MS222. Testes samples were collected from each specimen and were processed using the standard histological procedures, that consisted of dehydration in an ascending ethanol series, xylol, embedding in paraffin, sectioning at 7 µm, and staining with hematoxylin-eosin (HE). The diameter of 20 seminiferous tubules (Dst), height of germinal epithelium (Hge), gonadosomatic index (GSI) and gonad volume (gV) were determined monthly. Based on morphometric and morpho-physiological characteristics, the testes consisted of a network of anastomosed tubules with non-restricted cystic spermatogenesis, and a permanent germinal epithelium. This is the first report of a permanent germinal epithelium in A. tropicus. Five reproductive classes were histologically identified: Class I Regressed; Class II Early Maturation; Class III Mid Maturation; Class IV Late Maturation; Class V Regression. Monthly GSI, gV and Dst values were lower in January and February, the testis showed spermatozoa remains and a regenerating discontinuous germinal epithelium. In March spermiogenesis increased and proliferation of spermatogonia decreased. Male tropical gar followed a seasonal reproductive cycle, indicated by the monthly variation of the reproductive classes and the reproductive season processes observed, and for which temperature and rainfall seem to stimulate reproductive activity and spermiation. Rev. Biol. Trop. 64 (4): 1597-1609. Epub 2016 December 01.

Resumen:A. tropicus tiene un papel ecológico importante, como regulador de otras poblaciones de peces, en los cuerpos de agua de México, pero sus poblaciones silvestres se reducen. Una alternativa de conservación es el cultivo, el cual requiere caracterizar el ciclo reproductivo por medio del estudio de estructuras germinales y somáticas de los testículos, conocimientos que son básicos para formar modelos de aprovechamiento y conservación. Se capturaron mensualmente tres machos sexualmente maduros (N = 24), con un promedio de sL = 47.2 cm en Laguna de Pomposú, Jalpa de Méndez (18°19´59" N - 93°01´12" W), Tabasco, México, de octubre 2009 a septiembre 2010. La técnica de captura fue red de arrastre, se transportaron vivos al laboratorio de acuicultura tropical, DACBiol, UJAT. Los machos recolectados se sacrificaron con baños de inmersión en sobredosis de MS222, los testículos se procesaron para análisis histológico. Se determinó mensualmente el diámetro de 20 túbulos seminíferos (Dst), altura de epitelio germinal (Hge), índice gonadosomático (GSI) y volumen de gónada (gV). Características morfo-fisiológicas del testículo muestran que está constituido de una red de túbulos anastomosados con espermatogénesis quística no restringida, y un epitelio germinal permanente, de nuestro conocimiento es la primera vez que se reporta este tipo de epitelio en Holostei (Lepisosteiformes: Lepisosteidae). Se identificaron cinco clases reproductivas: Clase I Recrudescencia, Clase II Madurez temprana, Clase III Madurez intermedia, Clase IV Maduración tardía, Clase V Regresión, que al contrastarlo con el valor mensual de los indicadores sexuales "GSI, gV, Dst" muestra un patrón de variación; durante enero-febrero se presentan valores bajos, se observa un epitelio germinal discontinuo en regeneración; durante marzo se incrementa la proliferación de espermatogonias disminuyendo la espermatogénesis. Los machos de A. tropicus muestran una actividad reproductora estacional anual, explicado por las variaciones mensuales de los indicadores reproductores, donde la temperatura y la precipitación parecen tener un papel importante como factores que estimulan la actividad reproductora y por tanto la espermiación.

The reproductive biology of the Caspian green lizard, Lacerta strigata (Sauria: Lacertidae) in Iran / La biología reproductiva de la lagartija verde del Mar Caspio, Lacerta strigata (Sauria: Lacertidae) en Iran

The Caspian Green Lizard, Lacerta strigata Eichwald, 1831, is a member of the Lacertidae family distributed in the Caspian coast of northern Iran. The specimens were found in coastal dunes, hilly areas and pastureland containing some shrubby cover. In this research, the reproductive biology of this species was studied from April 20 to September 5, 2013. Forty eight adult specimens including 24 females and 24 males were collected by hand at midday from three sampling stations (Goharbaran, Ab-Bandansar and Ab-Bandankesh) of Sari County, located in Mazandaran Province of Iran. Ovaries and testes were removed and processed for histological and morphometric studies. In females, there were 6­17 follicles in each ovary. Totally, 6­10 oviductal eggs were observed in mature females. The oogenic and spermatogenic cycle begins from late March, mating starts from early May, with oviposition occurring from late May to late June, with the possibility of producing a secondary clutch later in the season. In males, the mean number and mean diameter of seminiferous tubules were 86.95 and 190.4750 microns, respectively. The mean diameter of tunica albuginea, germinal layer and lumen were 18.75, 69.79 and 144.27 microns, respectively. Maximum reproductive activity occurs from early May to early June, reduces from early July and ends in August. Hence, oogenesis and spermatogenesis occurs from April through July, L. strigata follows a seasonal reproductive cycle with associated type.

La lagartija verde, Lacerta strigata Eichwald, 1831 es un miembro de la familia Lacertidae distribuido en la costa del mar Caspio en el norte de Irán. Los especímenes se encontraron en las dunas costeras, zonas de colinas y pastos que contienen algo de cubierta arbustiva. En esta investigación, la biología reproductiva de esta especie fue estudiada del 20 de abril al 5 de septiembre de 2013. Cuarenta y ocho ejemplares adultos, incluyendo 24 hembras y 24 machos fueron recogidos a mano al mediodía en tres estaciones de muestreo (Goharbaran, Ab-Bandansar y AB- Bandankesh) del condado de Sari, ubicado en la provincia Mazandaran de Irán. Los ovarios y los testículos fueron retirados y procesados para estudios histológicos y morfométricos. En las hembras, se observaron 6­17 folículos en cada ovario. En total, se encontraron 6­10 huevos en los oviductos de hembras maduras. El ciclo oogénico y la espermatogénesis comenzaron a partir de fines de marzo, el apareamiento se inició desde principios de mayo con la oviposición ocurriendo desde fines de mayo hasta fines de junio. Las hembras depositan 6­10 huevos por puesta, con la posibilidad de producir una segunda puesta más adelante en la temporada. En los machos, el número medio y el diámetro medio de los túbulos seminíferos fueron 86,95 y 190,475 micras, respectivamente. El diámetro medio de túnica albugínea, la capa germinal y lumen fueron de 18,75, 69,79 y 144,27 micras, respectivamente. La actividad reproductiva máxima se produce desde principios de mayo hasta principios de junio, se reduce desde principios de julio y termina en agosto. Por lo tanto, la ovogénesis y espermatogénesis se producen a partir de abril a julio, L. strigata sigue una temporada ciclo reproductivo con tipo asociado.

Cellular development of the germinal epithelium during the gametogenic cycle of the golden mussel Limnoperna fortunei (Bivalvia: Mytilidae)

AbstractThe golden mussel Limnoperna fortunei is an invasive species that has quickly dispersed and colonized several potential different habitats distributed all over the world, causing environmental and economic impacts. Thus, in order to contribute to a better understanding of the reproductive aspects of L. fortunei, we described the cellular dynamic of the male and female germinal epithelium during the annual reproductive life history of this species, with the use of high resolution histology. An approximate of 1 200 specimens of L. fortunei were sampled periodically on the upper Paraná River floodplain (Brazil), from March 2010 to December 2012. Based on the activity of the germinal epithelium and consequent germ cell development, this study has resulted in the recognition of the following reproductive phases: Developing, Spawning Capable, Regressing and Regenerating. In the characterization of these phases, the following germ cells were described for males: spermatogonia, primary and secondary spermatocytes, spermatids and spermatozoa. Cell nests, oogonia, early prophase oocytes, previtellogenic oocytes and vitellogenic oocytes (early vitellogenic oocytes, middle vitellogenic oocytes and full-grown oocytes) were described for females. The morphological data and reproductive parameters obtained, showed the value of the cellular dynamics of the germinal epithelium, for the understanding of the cyclic gonadal events during the adult reproductive life of the mollusk in general. These results on the gametogenesis of this invasive species may be a fundamental tool for the development of control strategies and programs implementation, to reduce their proliferation and impacts in natural local environments. Rev. Biol. Trop. 64 (2): 521-536. Epub 2016 June 01.

ResumenEl mejillón dorado Limnoperna fortunei (Dunker, 1857) es una especie invasora que se ha dispersado rápidamente y ha colonizado diferentes hábitats potenciales distribuidos por todo el mundo, causando impactos ambientales y económicos. El control de esta especie depende del conocimiento de los aspectos reproductivos. Entre marzo 2010 y diciembre 2012 fueron muestreados periodicamente alrededor de 1 200 especímenes de L. fortunei en la planicie de inundación del Alto Rio Paraná, Brasil. Con el fin de contribuir con una mejor comprensión de los aspectos reproductivos de L. fortunei, se describió la dinámica celular del epitelio germinativo masculino y femenino durante la vida reproductiva anual de esta especie, mediante histología de alta resolución basada en la actividad del epitelio germinal y el consecuente desarrollo de las células germinales. En este estudio se reconocieron las siguientes fases reproductivas: desarrollo, capacidad de desove, regresión y regeneración. En los machos se describieron las siguientes células germinales: espermatogonias, espermatocitos primarios y secundarios, espermátidas y espermatozoides. Mientras que en las hembras se estudiaron: nidos celulares, ovogonias, ovocitos profásicos tempranos, ovocitos pre-vitelogénicos y ovocitos vitelogénicos (ovocitos vitelogénicos tempranos, ovocitos vitelogénicos y ovocitos completamente desarrollados).Los datos morfológicos y parámetros reproductivos que se muestran aquí confirman cómo la dinámica celular del epitelio germinal permite la comprensión de los acontecimientos cíclicos gonadales durante la vida reproductiva de adultos del molusco, en general. El conocimiento de la gametogénesis de esta especie invasora puede convertirse en una herramienta fundamental para el desarrollo de estrategias de control y aplicación de programas para disminuir su proliferación en ambientes naturales.

Effects of nandrolone decanoate on spermatogenesis in Wistar rats with and without physical training / Efectos del decanoato de nandrolona sobre la espermatogénesis en ratas Wistar con y sin entrenamiento físico

Androgenic anabolic steroids (AAS) are artificial testosterone analogues, used as medicine in chronic diseases, because they increase protein synthesis generating muscle hypertrophy. Its effect has caught the attention of athletes and gym users, thus their consumption has become epidemic, due to easy marketing, the immediate results and the false impression that it doesn't carry health risks. Such risks may globally harm the body. This study aims to investigate the influence on spermatogenesis of using nandrolone decanoate with or without physical training. Twenty-four rats, divided into four groups were used: sedentary group (SG), sedentary on steroids group (SSG), trained group (TG) and trained on steroids group (TSG). The animals were trained on voluntary exercise wheel twice a week during 12 weeks, and were subsequently euthanized by decapitation. Groups TSG and SSG received intramuscular injections of 5 mg / kg of the AAS. It was found that there was a greater cellularity in TSG, suggesting interference between androgen therapy and physical training on the mount of cells in the seminiferous epithelium. Comparing the TSG group with the SG, it is noticed that the physical training associated with the use of steroid tends to affect cell division without compromise, however, the number of spermatogonia, did not significantly vary compared to the control group. Finally, it seems that there was no significant statistical difference among the groups in terms of spermatogenesis yield, so that can not be said that the use of nandrolone decanoate, with or without the physical training, interfere with fertility.

Los esteroides anabólicos androgénicos (EAA) son análogos de testosterona artificiales, utilizados como medicina en las enfermedades crónicas, ya que aumentan la síntesis de proteínas generando hipertrofia muscular. Su efecto ha llamado la atención de atletas y usuarios de gimnasios, por lo que su consumo se ha convertido en epidemia, debido a la comercialización fácil, los resultados inmediatos y la falsa impresión de que no conllevan riesgos para la salud. Este estudio tiene como objetivo investigar la influencia de utilizar decanoato de nandrolona con o sin entrenamiento físico sobre la espermatogénesis. Se utilizaron 24 ratas, divididas en cuatro grupos: entrenado (GE), entrenado en esteroides (GEE), sedentario en esteroides (GSE) y sedentario (GS). Los grupos GEE y GSE recibieron inyecciones intramusculares de 5 mg/kg de la EAA. Los animales fueron entrenados con ejercicio voluntario en la rueda de correr dos veces por semana durante 12 semanas. Luego, los animales fueron sacrificados por decapitación. Se encontró que hubo una mayor celularidad en GEE, lo que sugiere la interferencia entre la terapia con andrógenos y entrenamiento físico en la cantidad de células en el epitelio seminífero. Comparando el grupo GEE con el GS, se observa que el entrenamiento físico asociado con el uso de esteroides tiende a afectar a la división celular sin comprometerla, sin embargo, el número de espermatogonias, no varió significativamente en comparación con el grupo control. Finalmente, no hubo diferencia significativa entre los grupos en términos de rendimiento de la espermatogénesis, por lo que no se puede decir que el uso del decanoato de nandrolona, con o sin el entrenamiento físico, interfiere con la fertilidad.

La vitamina A: reguladora de la espermatogénesis / Vitamin A: regulator of spermatogenesis

La vitamina A es esencial para el desarrollo de las células germinales masculinas, la fertili-dad y la espermatogénesis normal. El ácido retinoico, metabolito activo de la vitamina A, es necesario para la maduración de las espermatogonias y la entrada correcta de las células germinales en la profase meiótica en los testículos. La expresión de Stra8, fundamental en la meiosis y la espermatogénesis normal, está directamente relacionada con la disponibilidad del ácido retinoico. Este artículo se centra en el proceso de espermatogénesis y la interacción de la vitamina A con el ciclo seminífero, a fin de explicar la relación existente entre la disminución de los aportes de vitamina A, y las alteraciones presentadas en la espermatogénesis de humanos y algunos animales. También, se consideran los efectos de otros genes implicados en la síntesis de la vitamina A, su transporte y su degradación, y se discuten los posibles mecanismos celu-lares que pueden verse afectados por la falta de señalización de la vitamina A, en particular, la regulación del ciclo celular y la interacción célula-célula, puntos críticos para la esperma-togénesis normal. En esta revisión de los 42 artículos científicos más relevantes del tema, se hizo una búsqueda de información en bases de datos como Science Direct, Scielo, Medline, Redalyc y Pubmed, durante los meses de enero a abril de 2014. Se encontró que en diversos estudios se ha demostrado que se puede controlar in vitro la proliferación de células germinales y su dife-renciación, y además, que un deficiente consumo de vitamina A estaría relacionado con la disminución de la fertilidad masculina.

Vitamin A is essential for the development of male germ cells, male fertility and normal sper-matogenesis. Retinoic acid, an active metabolite of vitamin A, is necessary for the maturation of spermatogonia and the correct entry of germ cells in meiotic prophase in the testicles. Stra8expression, which is essential for normal spermatogenesis and meiosis, is directly related to the availability of retinoic acid. This review of 50 scientific articles relevant to the topic will focus on the process of sperma-togenesis and interaction of vitamin A with the seminiferous cycle, in order to explain the re-lationship between the decrease in vitamin A and alterations in spermatogenesis of humans and some animals. Also, it considers the effects of other genes involved in the synthesis of vitamin A, transport, and degradation. Similarly, potential cellular mechanisms that may be affected by the lack of signs of vitamin A will be discussed, in particular the regulation of cell cycle and cell-cell interactions, which are critical for normal spermatogenesis. In conclusion, studies have shown that you can control in vitro germ cell proliferation, and differentiation and poor intake of vitamin A can be related to a decrease in male fertility.

Histology and ultrastructure of male reproductive system of the Indian Spiny lobster Panulirus homarus (Decapoda: Palinuridae) / Histología y ultraestructura del sistema reproductor masculino de la langosta espinosa de la India Panulirus homarus (Decapoda: Palinuridae)

The spiny lobster Panulirus homarus, distributed along the Southeast and Southwest coasts of India, is an important commercial species having mariculture potential. Despite its importance, the structural and ultrastructure features of male gonads from this species have received scarce attention. Hence this study was aimed to describe the male reproductive tract of the species, using standard histological and electron microscopy techniques. Gonads from 94 specimens of P. homarus ranging in carapace length 37mm-92mm from vizhinjam (Southwest coast of India.) were obtained and processed for the study (Histology-70 numbers & ultrastructure-24 numbers). The male reproductive system consists of paired testis and vas deferens located in the cephalothoracic region. Macroscopically, the reproductive tract was observed in lobsters >35mm carapace length. In immature testis, spermatogonia were seen which measured 6.9-13.8µm in diameter and in the mature testis primary (5.4-5.9µm) and secondary spermatocytes (2.8-3µm) and spermatids (2.2-2.4µm) were present. Each vas deferens consists of proximal and distal portions. The spermatophoric mass begins formation in the proximal vas deferens. In the distal vas deferens the spermatophoric mass containing the spermatozoa are arranged in packets towards the periphery by the gelatinous matrix produced by the typhlosole. Ultrastructurally, the spermatogonia have lamina, nucleus and mitochondria like bodies, the primary spermatocytes have nucleus, dense chromatin and vacuolated cytoplasm and the spermatids have mitochondria, endoplasmic reticulum and centrioles. The endoplasmic reticulum and the nuclear envelope in the spermatids form the acrosome. The radial arms with microtubules are formed in association with the dense endoplasmic reticulum, near the nucleus. The sperm has a spherical structure with the nucleus, lamellar region, spikes and acrosome. This is the first comprehensive report of the structure of the male gametes and spermatogenesis in P. homarus from Indian waters.Rev. Biol. Trop. 62 (2): 533-541. Epub 2014 June 01.

La langosta espinosa Panulirus homarus, distribuida a lo largo de las costas sudeste y sudoeste de la India, es una especie de importancia comercial con gran potencial para la mari-cultura. A pesar de su importancia, las características estructurales y ultraestructurales de las gónadas masculinas de esta especie han sido poco estudiadas. Debido a esto, el objetivo de este estudio fue describir el aparato reproductor masculino de dicha especie, utilizando técnicas convencionales de microscopía histológica y electrónica. Se procesaron 94 ejemplares de P. homarus de vizhinjam (costa suroeste de la India) (70 individuos para histología y 24 para ultraestructura), cuyos caparazones variaron de 37 mm a 92 mm de longitud. El sistema reproductor masculino de esta especie consistió en un par de testículos y un conducto deferente situados en la región céfalo-torácica. Macroscópicamente, el aparato reproductor se observó en langostas con una longitud de caparazón >35mm. En testículos inmaduros, la espermatogonia midió 6.9-13.8μm de diámetro y se encontró presente en los testículos maduros primarios (5.4-5.9μm), espermatocitos secundarios (2.8 a 3 μm) y espermátidas (2.2-2.4μm). Cada conducto deferente consistió de porciones proximales y distales. La formación de la masa espermatofórica comienza en los conductos deferentes proximales. En el conducto deferente distal espermatofórico, la masa que contiene los espermatozoides está dispuesta en paquetes hacia la periferia, en una matriz gelatinosa producida por el tiflosol. Ultraestructuralmente, las espermatogonias presentan una lámina, núcleo y mitocondrias, los espermatocitos primarios tienen núcleo, cromatina densa y citoplasma vacuolado, mientras que las espermátidas tienen mitocondrias, retículo endoplasmático y centríolos. En las espermátidas, el retículo endoplásmico y la envoltura nuclear forman el acrosoma. Los brazos radiales con microtúbulos se forman en asociación con el retículo endoplásmico denso, cerca del núcleo. El esperma presenta una estructura esférica con el núcleo, la región laminar, las espinas y el acrosoma. Este documento constituye el primer informe exhaustivo de la estructura de los gametos masculinos y espermatogénesis en P. homarus de la India.

Maca (Lepidium meyenii Walp), una revisión sobre sus propiedades biológicas / Maca (Lepidium meyenii Walp), a review of its biological properties

La maca (Lepidium meyenii) es una planta que crece sobre los 4000 metros de altitud en los Andes Centrales del Perú, presenta diferentes variedades de acuerdo al color de su hipocótilo. La presente revisión resume los resultados de estudios sobre los efectos de la maca en la función sexual, la espermatogénesis, la función reproductiva femenina, la memoria, la depresión y la ansiedad, como energizante y contra la hiperplasia benigna de próstata, osteoporosis y síndrome metabólico. Se discute también su efecto antienvejecimiento y la seguridad en su consumo. Se han demostrado diferencias en el efecto de las variedades negra, amarilla y roja de maca. La maca negra es la que mejores resultados presenta sobre la espermatogénesis, la memoria y contra la fatiga, mientras que la maca roja es la variedad que mejor revierte la hiperplasia benigna de próstata y la osteoporosis inducida experimentalmente. Además, la maca reduce los niveles de glucosa, y su consumo se relaciona con la reducción de la presión arterial y un mejor puntaje de salud. Estudios experimentales han demostrado que el consumo a corto como a largo plazo no muestra toxicidad tanto in vivo como in vitro. A pesar que los estudios experimentales han demostrado que la maca presenta diversos efectos benéficos, son necesarios más estudios clínicos para confirmar estos resultados.

Maca (Lepidium meyenii) is a plant that grows above 4000 altitude meters in Peru’s Central Andes; it has different varieties according to the color of the hypocotyl. This review summarizes the results of studies about the effects of maca on sexual function, spermatogenesis, female reproductive function, memory, depression and anxiety, and energy as well as effects on benign prostatic hyperplasia, osteoporosis and metabolic syndrome. Its anti-aging effect is also discussed as well as safety in consumption. Differences have been shown between the effects of the black, yellow and red maca varieties. Black maca shows the best results on spermatogenesis, memory and fatigue, while red maca is the variety that reverses the benign prostatic hyperplasia and experimentally induced osteoporosis. In addition, maca reduces the glucose levels, and its consumption is related to the lowering of blood pressure and an improved health score. Experimental studies have proven that short and long term consumption don’t show in vivo and in vitro toxicity. Although experimental studies have shown that maca has diverse beneficial effects, more clinical studies are needed to confirm these results.

Azoospermia y fertilización asistida: rol de la histología testicular en el éxito de icsi / Azoospermia and assisted reproduction: role of testicular histology in the success of ICSI

Introducción: La infertilidad masculina afecta aproximadamente al 7por ciento de los hombres, presentándose hasta el 15 por ciento de ellos con azoospermia. El conocimiento del tipo de azoospermia (obstructiva o no obstructiva) y la localización de la falla (pre-testicular, testicular o post-testicular) es vital para conocer el pronóstico de fertilidad de la pareja y plantear un plan terapéutico adecuado. Actualmente, la extracción de espermatozoides desde epidídimo o testículo de pacientes azoospérmicos, y la posterior inyección intracitoplásmática de éstos (ICSI, por sus siglas en inglés) ha permitido obtener embriones viables para su posterior transferencia. Materiales y métodos: Estudio descriptivo retrospectivo de 42 parejas infértiles con diagnóstico de azoospermia; que se sometieron a biopsia testicular, ICSI y posterior transferencia de embriones, entre los años 2004 y 2012. Se lleva a cabo un análisis de la edad de los pacientes, resultados de la histopatología testicular y su asociación con los resultados de la fertilización asistida. Resultados: 42 pacientes azoospérmicos se sometieron a biopsia testicular y extracción de espermatozoides en el mismo acto quirúrgico. La edad promedio de los pacientes fue de 36 años para los hombres y 32 años para las mujeres. En el análisis histológico de los tejidos testiculares, el 31por ciento de los pacientes presentaban espermatogénesis conservada (EC), el 35.7 por ciento atrofia mixta (AM), el 14.3 por ciento hipoespermatogénesis (HE), el 14.3 por ciento detención de la maduración (DM) y un 4.8 por ciento presentaba otras histologías. Lograron embarazo clínico 14 de 42 parejas (33,3 por ciento), siendo la tasa de embarazo específica por patología de 38,5 por ciento para EC, 26.7 por ciento para AM, 50 por ciento para HE, 16,7 por ciento para DM y 50 por ciento para las otras histologías. 12 de las 42 parejas realizaron más de un ciclo de transferencias...

Introduction: Male infertility affects approximately 7percent of men, presenting up to 15 percent with azoospermia. Knowing the type of azoospermia (obstructive or non-obstructive) and the location of the problem (pre-testicular, testicular and post-testicular) is vital to recognize the fertility prognosis of the couple and present a proper treatment plan. Currently, the extraction of sperm from epididymis or testis of azoospermic patients, and subsequent intracytoplasmic sperm injection (ICSI) has yielded viable embryos for transfer. Materials and Methods: Retrospective study of 42 infertile couples diagnosed with azoospermia, who underwent testicular biopsy, ICSI and subsequent embryo transfer, between 2004 and 2012. We performed an analysis of the patients’ age, testicular histopathology results and their association with assisted fertilization outcome. Results: 42 azoospermic patients underwent testicular biopsy and sperm extraction in the same surgery. The average age of patients was 36 years for men and 32 years for women. Histologic analysis of testicular tissue showed that 31 percent of patients had normal spermatogenesis (NS), 35.7 percent mixed atrophy (MA), 14.3 percent hypospermatogenesis (HS), 14.3 percent maturation arrest (MTA) and 4.8 percent had other histologies. 14 of 42 couples achieved clinical pregnancy (33.3 percent), with a specific pregnancy rate of 38.5 percent for NS, 26.7 percent for MA, 50 percent for HS, 16.7 percent for MTA and 50 percent for other histologies. 12 of 42 couples underwent more than one transfer cycle. Conclusions: The use of ICSI is a suitable alternative for infertile couples with severe male factor. The results of this technique are favorable for most histologies. Patients with MA exhibit sertoli solo syndrome and / or tubular sclerosis foci associated to regions with normal spermatogenesis, enabling the sperm extraction for ICSI.

Rol de la isoforma 2 de la glicerol-3-fosfatoaciltransferasa en el metabolismo lipídico testicular / Role of isoform 2 of glycerol-3-phosphate acyltransferase in testicular lipid metabolism / Função da isoforma 2 da glicerol-3-fosfatoaciltransferase no metabolismo lipídico testicular

El primer paso en la síntesis de novo de glicerolípidos es la acilación del glicerol-3-fosfato, la cual es catalizada por la enzima glicero-3-fosfato aciltransferasa (GPAT). En mamíferos han sido descriptas hasta el momento cuatro isoformas de GPAT, las cuales pueden diferenciarse por su localización tisular y subcelular, y por su sensibilidad a reactivos que reaccionan con los grupos sulfhidrilos. El objetivo de este trabajo fue estudiar la localización y función de GPAT2, una isoforma mitocondrial que se expresa principalmente en testículo utilizando como modelo células CHO-K1 que sobreexpresan GPAT2. Se observó que esta isoforma utiliza como sustrato específicamente al ácido araquidónico, estimula la síntesis de triacilgliceroles (TAG) con alto contenido de ácido araquidónico, y favorece la incorporación de [1-14C] ácido araquidónico en los TAG. Utilizando modelos animales se observó por un lado que el ARNm de GPAT2 se expresa sólo en los espermatocitos primarios, mientras que la expresión de la proteína se mantiene a lo largo de la espermatogénesis; y por otro lado que la expresión de GPAT2 varía durante el desarrollo sexual, alcanzando un máximo de expresión y actividad a los 30 días de edad en la rata. A esta edad se observó también un máximo en el contenido de TAG y de AA esterificado en los TAG del testículo. Se concluye que los resultados sugieren que GPAT2 sería la enzima responsable de esterificar el ácido araquidónico en los TAG de las células de la línea espermática.

De novo glycerolipid synthesis begins with the acylation of glycerol-3 phosphate catalyzed by glycerol-3-phosphate acyltransferase (GPAT). In mammals, at least four GPAT isoforms have been described, differing in their cell and tissue locations and sensitivity to sulfhydryl reagents. The objective of the present work was to study localization and function of GPAT2, a mitochondrial isoform that is mainly expressed in testis, using as a model CHO-K1 cells that overexpress GPAT2. Incubation of GPAT2-transfected CHO-K1 cells with arachidonoyl-CoA increased GPAT activity 2-fold and the incorporation of [1-14C] arachidonate into TAG. Consistently, arachidonic acid was present in the TAG fraction of cells that overexpressed GPAT2, but not in control cells, corroborating GPAT2's role in synthesizing TAG that is rich in arachidonic acid. In rat and mouse testis, Gpat2 mRNA was expressed only in primary spermatocytes; the protein was also detected in late stages of spermatogenesis. During rat sexual maturation, both the testicular TAG content and the arachidonic acid content in the TAG fraction peaked at 30 d, matching the highest expression of Gpat2 mRNA and protein. These results strongly suggest that GPAT2 expression is linked to arachidonoyl-CoA incorporation into TAG in spermatogenic germ cells.

O primeiro avanço na síntese de novo de glicerolipídios é a acidulação do glicerol-3-fosfato, a qual é catalisada pela enzima glicerol-3-fosfato aciltransferase (GPAT). Em mamíferos tem sido descritas até o momento quatro isoformas de GPAT, as quais se podem distinguir pela sua localização tissular e subcelular, e pela sua sensibilidade aos reagentes que reagem com os grupos sulfidrilos. O objetivo deste trabalho foi estudar a localização e função de GPAT2, uma isoforma mitocondrial que se expressa principalmente no testículo, utilizando como modelo células CHO-K1 que superexpressam GPAT2. Observou-se que esta isoforma utiliza como substrato especificamente o ácido araquidônico, estimula a síntese de triacilgliceróis (TAG) com alto conteúdo de ácido araquidônico, e favorece a incorporação de [1-14C] ácido araquidônico nos TAG. Utilizando modelos animais se observou de um lado que o ARNm de GPAT2 se expressa apenas nos espermatócitos primários, enquanto que a expressão da proteína se mantém ao longo da espermatogênese; e do outro que a expressão de GPAT2 varia durante o crescimento sexual, atingindo um máximo de expressão e atividade aos 30 dias de idade no camundongo. Nessa idade foi observado também um máximo no conteúdo de TAG e de AA esterificado nos TAG do testículo. Conclui-se que os resultados sugerem que GPAT2 seria a enzima responsável por esterificar o ácido araquidônico nos TAG das células da linha espermática.

Morphological aspects of spermatogenic cells at different stagesof sexual maturation in black isogenic C57BL/6/Uni mice / Aspectos morfológicos de células de la espermatogénesis en diferentes etapas de maduración sexual del ratón negro isogénico C57BL/6/Uni

In order to study the morphological changes that occur in cells of the testes of isogenic black mouse C57BL/6/Uni into three periods during spermatogenetic used 15 mice divided into 3 groups of 5 animals with 40, 50 and 60 days of age. The mice were sacrificed and weighed. Testicles were weighed and measured, and histologically processed and stained with HE, PAS and Masson Massom-H and evaluated under light microscopy. It was observed that group I with 40 days of age in the seminiferous tubules had a lumen with sparse small amount of interstitial tubular cells. In the seminiferous epithelium type A spermatogonia, intermediate and B were identified, which occupied the compartment adbasal and intermingled with these cells in spermatocytes I in Pachytene and leptotene was observed, whereas in the adluminal compartment Golgi phase spermatids we observed the presence of acrosomal granule. In group II, the cells of the seminiferous epithelium were developed and it was observed in round spermatids cephalic hood phase plus many elongated spermatids in acrosome phase and Sertoli cells. In group III, 60 days old, it was found that seminiferous epithelium which was of the tubules had elongated spermatids in acrosome phase and maturation, with elongated nuclei and acrosomal system typical of spermiation in the presence of sperm and residual bodies near the tubular lumen. Therefore morphological evolution of germ cell testicular spermatids can be checked and recognized in its four phases: golgi, cap, acrosome and maturation over the age of the animal.

Con el fin de estudiar los cambios morfológicos que ocurren en las células de los testículos del ratón negro isogénico C57BL/6/Uni en tres períodos durante el proceso espermatogenético, se utilizaron 15 ratones divididos en 3 grupos de 5 animales con 40, 50 y 60 días de edad. Los ratones fueron sacrificados y pesados. Luego se pesaron y midieron los testículos, para ser finalmete procesados histológicamente y teñidos con HE, PAS y tricrómico Massom-H y evaluados bajo microscopía de luz. Se observó en el grupo I con 40 días de edad que los túbulos seminíferos tenían un lumen pequeño con escaza cantidad de células tubulares intersticiales. En el epitelio seminífero se identificaron espermatogonias tipo A, intermedio y B, que ocuparon el compartimiento adbasal y entremezcladas con estas células, se observó los espermatocitos I en paquiteno y leptoteno, mientras que en el compartimiento adluminal se observaron espermátidas de fase Golgi en presencia de gránulos acrosomales. En el grupo II, las células del epitelio seminífero se desarrollaron y fue posible observar espermátidas redondas en fase de capuz cefálico además de numerosas espermátidas elongadas en fase acrosómica y células sustentaculares. En el grupo III, de 60 días de edad, se encontró que el epitelio seminífero que revestía los túbulos presentaban espermátidas alargadas en fase acrosómica y de maduración, con sus núcleos alargados y el sistema acrosomal típico de la espermiación, con la presencia de espermatozoides y cuerpos residuales cerca del lumen tubular. Así, se puede comprobar con el paso de la edad del animal, la evolución morfológica de las células germinativas testiculares y reconocer las espermátidas en sus cuatro fases: golgi, capuchón, acrosomal y de maduración.

Efecto del extracto etanólico de maca (Lepidium meyenii Walp) sobre los niveles de testosterona y el conteo de espermatozoides de ratones macho / Effects of ethanol extract of maca (Lepidium meyenii Walp) on serum testosterone levels and sperm count of male mice

Objetivos: Determinar el efecto del extracto etanólico de maca sobre la concentración de testosterona y el conteo de espermatozoides de ratones machos jóvenes. Material y métodos: Ratones machos Balb-C53 fueron repartidos aleatoriamente en dos grupos: uno experimental, que recibió 2 g/kg de peso corporal de extracto etanólico de maca por vía oral durante 14 días y otro control, que recibió placebo. En cada ratón se determinó el peso corporal, el peso de los órganos reproductivos, la concentración sérica de testosterona y el conteo de espermatozoides. Resultados: El peso corporal y el peso de los testículos y epidídimos no fueron afectados por el tratamiento con extracto etanólico de maca. El peso de las vesículas seminales en los ratones del grupo experimental fue mayor que en el grupo control (35,09 ± 7,70 vs. 26,19 ± 7,00 mg; p=0,007). La concentración sérica de testosterona de los animales tratados con maca fue mayor que en el grupo control (6,96±1,91 vs. 0,31 ± 0,36 ng/dl; p=0,000001). El conteo de espermatozoides en los ratones del grupo experimental fue mayor que en los controles (282,42 ± 104,58 vs. 187,00 ± 57,06 millones de células/ml, respectivamente; p=0,011). Conclusión: El extracto etanólico de maca en dosis de 2 g/kg de peso corporal indujo el aumento de los niveles séricos de testosterona y del conteo de espermatozoides en ratones machos jóvenes. (AU)

Objective: To determine the effect of ethanol extract of maca on the concentration of testosterone and sperm count of young male mice. Material and methods: Male mice Balb-C53 were randomized into two groups: experimental, which received 2 g/kg body weight ethanolic extract of maca orally for 14 days and a control group that received only placebo. In each mouse was determined the body weight, reproductive organ weights, serum testosterone and sperm count. Results: Body weight and weight of the testes and epididymides were not affected by treatment with ethanolic extract of maca. The weight of seminal vesicles in mice inthe experimental group was higher than in the control group (35,09 ± 7,70 vs. 26,19 ± 7,00 mg; p=0,007). Serum testosterone treated animals was higher than in the control group (6,96 ± 1,91 vs. 0,31 ± 0,36 ng/dL; p=0,000001). The sperm count in mice in the experimental group was higher than in controls (282,42 ± 104,58 vs. 187,00 ± 57,06 million cells/mL respectively; p=0,011). Conclusions: Ethanolic extract of maca at dose of 2 g/kg of body weight induced increased serum levels of testosterone and sperm count in young male mice. (AU)